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产品选择指南

技术服务信息

机构用户解决方案

磷蛋白富集试剂盒
品牌 Code No. 包装量 价格 说明书 数量
Clontech 635624 6 Preps 3,937 元
Clontech 635666 1 Purification 947 元
Clontech 635626 500 ml 2,007 元
 
Code No. 产品名称
635624   Phosphoprotein Enrichment Kit
635666   Phosphoprotein Enrichment Starter Kit
635626   Phosphoprotein Kit - Buffer A
 
■ 产品描述
本制品基于亲和原理,为从哺乳动物细胞和组织中提取磷酸化蛋白质提供了有效方法。富集试剂盒中包含了一整套的buffer和6个高结合力的柱子,用于富集胞质中和膜结合的磷酸化蛋白质,无需考虑例如丝氨酸、酪氨酸或苏氨酸等的氨基酸修饰。
 
这种富集方法的优势:
· 实验操作快速,从细胞到样品纯化的平均时间少于2 h。
· 操作简单直接,包括4步,将提取/上样buffer加到细胞或组织沉淀中来提取细胞总蛋白质,
   然后将提取产物加到亲和纯化柱上,洗涤,最后使用不含清洁剂的Elution Buffer将结合的磷酸化
   蛋白质洗脱下来。
 
 
· 一种Buffer多个用途,Extraction/Loading Buffer可以用于蛋白质提取和纯化步骤,
   而不需要更换缓冲液,这样便节省了时间也防止样品丢失。
· 实验过程是非变性的,所以整个过程中磷酸化蛋白质是保持折叠构象的,包括提取和洗脱的步骤。
 
每个纯化柱的最大结合能力约为4 mg磷酸化蛋白质。
 
高选择性富集磷酸化蛋白质
本富集试剂盒可以用于任何类型的哺乳动物细胞。已做过测试的细胞系包括NIH 3T3,HEK 293,HeLa,Cos-7和Jurkat细胞。富集效率很高,已经过Western Blotting分析证实。通过使用磷酸盐比色检测法,可以发现大部分的磷酸化蛋白质都在洗脱液中,在洗涤步骤的组分中只检测到痕量,可以忽略。
使用本试剂盒得到的磷酸化蛋白质是浓缩液,可以使用多种不同的方法进行分析,包括质谱、二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)等。
 
■ 特点
· 非变性条件下操作,可保持蛋白质的构象和溶解性
· 适用于质谱和2D-PAGE等多种下游应用
· 提高磷酸化检测实验的灵敏度
 
■ 应用
· 质谱样品制备
· 磷酸化分析
· 2D-PAGE样品制备
 
■ 实验例
使用本制品可以高效富集磷酸化蛋白质。提取HEK 293细胞的总蛋白质,取大约3 mg加入到本制品提供的磷酸化蛋白质亲和纯化柱上。Lane1是提取产物,Lane2是流穿液,Lane3是洗涤组分,Lane4是洗脱组分,然后分别使用特异性结合磷酸化AKT、PTEN和GSK3β蛋白质的抗体经Western Blotting检测,结果分别如图A、B、C所示,可以看出在洗脱液部分清晰地检测到了磷酸化蛋白质。请注意,样品在凝胶上样之前没有被稀释或浓缩。
 
 
产品详情请点击以下链接:
https://www.takarabio.com/products/protein-research/purification-products/phosphoprotein-purification/phosphoprotein-enrichment-kit?catalog=635624